APOC1基因rs4420638对广西红水河流域长寿人群血脂水平的影响分析

载脂蛋白的基本功能包括运载脂类物质、激活脂蛋白代谢酶、识别受体等。APOC1基因主要在肝脏中表达，少量表达于肺、皮肤、睾丸和脾脏。rs4420638多态为位于19号染色体长臂上的APOE/C1/C4/C2基因簇内的一个常见变异(A>G)，与血脂水平、慢性炎症、冠心病等心脑血管病关系密切。本研究对广西红水河流域长寿群体的rs4420638进行分型，并分析其与血脂水平的相关性，以期了解该多态在长寿群体血脂代谢中的作用及其对寿命的可能影响。

1对象与方法

1.1研究对象

长寿组：496例，年龄≥90岁，祖居广西红水河流域(巴马、凤山、东兰、都安);子女组：723例，年龄60～75岁，为长寿家系子或女;对照组：611例，年龄60～75岁，当地健康老人。本研究的田野调查时间为2009年3-9月。

1.2方法

1.2.1血样采集空腹抽取静脉血8mL，其中5mL用于分离血清及血脂测定，余血用于DNA提取。

1.2.2血脂测定血清TC、TG采用酶法，HDL-C和LDL-C采用酶联免疫一步法。

1.2.3基因分型采用荧光多重酶连接反应(iMLDR)方法对rs4420638位点进行基因分型。引物：F：5’-ACTCCTCACAAGCCCTCCAATG-3’，R：5’-CAGCCCCTCATCTCGGGTAGA-3’。PCR反应体系为10μL，包含1×buffer(Takara)、3.0mmol/LMg2+、0.3mmol/LdNTP、1UTaqpolymerase(QiagenInc.)、1μLDNA和1μLPCR引物(浓度1μmol/L)。反应条件：(94℃20s，65℃40s，72℃1min30s)×11个循环;(94℃20s，59℃30s，72℃1min30)×24个循环。PCR产物中加入1USAP酶和1UExonucleaseI酶，37℃温浴1h，然后75℃灭活15min进行多重PCR产物纯化。连接反应结束后，在ABI3730XL测序仪上测序，确定基因型结果。

1.3统计学方法

采用SPSS16.0统计学软件分析，Hardy-Weinberg平衡采用拟合优度χ2检验;正态分布的计量资料以x±s表示，组间比较采用协方差进行分析;非正态分布的计量资料用中位数(四分位数间距)即M(IQR)表示，组间比较采用秩和检验;分类资料的组间比较采用卡方检验;采用多元线性回归(逐步法)分析血脂水平与基因型(AA=1，AG=2)、年龄、性别(男=1，女=2)、SBP、DBP、PP、BMI及FBG的相关性。

2结果

2.1APOC1rs4420638基因型及等位基因频率分布所有人群仅检出基因型AA和AG，未发现纯合突变基因型GG。3组人群的基因型及等位基因频率分布无差异。

2.2各组人群APOC1基因rs4420638多态性对血脂水平的影响总体人群及对照组G等位基因携带者的TC、LDL-C水平高于非G等位基因携带者(均P<0.05)。性别分层后发现，总体人群及长寿组的女性G携带者的TC和LDL-C水平均高于非G携带者(分别为P<0.01，P<0.05)，对照组男性的G携带者的TC水平高于非G携带者，而对照组女性的G携带者的LDL-C水平高于非携带者。子女组男性和女性群体不同基因型间的血脂水平无明显差异。

2.3血脂分层后APOC1rs4420638基因型对血脂水平的影响总体人群中，血脂正常亚组G等位基因携带者的TC和TG水平高于非G等位基因携带者(P=0.008和P=0.046);血脂异常亚组G携带者的LDL-C水平高于非G携带者(P=0.006)。长寿组和对照组中血脂正常和血脂异常亚组G和非G携带者的血脂水平无明显差异;而在子女的血脂异常亚组中，G携带者LDL-C水平高于非G携带者(P=0.033)。

2.4APOC1基因与血脂水平的多元线性回归分析在总人群和对照组中，TC、LDL-C的水平与APOC1基因rs4420638基因型呈正相关，即AG基因型频率越高，TC、LDL-C的水平越高;在子女组中HDL-C与APOC1基因型呈负相关，而在对照组中呈正相关;TG水平在各组中均未显示与基因型有相关性。另外，总人群和各组人群的TC、TG、LDL-C的水平多数尚与性别、DBP、BMI、FPG呈正相关，与年龄呈负相关;HDL-C的水平与DBP呈负相关，与年龄、BMI、FPG、呈负相关。

3讨论

本研究显示，广西红水河流域壮族人群rs4420638G等位基因频率约为0.09，稍低于华东汉族群体(0.12)。总体人群及对照组G携带者的TC和LDL-C水平明显高于非G携带者，线性回归分析也支持该变异与TC和LDL-C的相关性，提示了该变异对血脂代谢的不利影响，类似于东亚其他群体的结果。目前认为，APOC1可能通过以下途径影响血脂水平：(1)抑制肝脏TG受体而减少富含TG的脂蛋白的摄取，致过多的TG转化为LDL-C;(2)激活β-卵磷脂胆固醇脂酰转移酶(LCAT)，升高LDL-C水平;(3)抑制胆固醇酯转移蛋白(CETP)的活性，减少胆固醇酯向LDL的转化。因此，结合其他学者的研究，推测，当APOC1在rs4420638位点发生A>G变异时，上述过程将出现变化，例如APOC1的活性下降，对CETP的抑制减少，故LDL升高;肝TG受体解除抑制，肝TG摄取增多，并通过其他途径转化为LDL。令人迷惑的是，在长寿组女性中，G携带者也呈现类似的趋势。可能的解释是，长寿群体中性别比例过于悬殊(女多男少)及G携带者比较多所致。另外，性别分层后，各组女性群体的血脂水平亦普遍高于男性，说明血脂水平受性别影响较大。有报道称，女性的血脂水平终生都受激素变化影响，尤其是绝经期后的影响更为明显。至于其他人群或亚组的G携带者没表现出高的血脂水平，不排除另有其他未知的缓冲基因在抵消G变异的不利影响。